Sensor de flujo microfluídico bidireccional FLUIGENT ODROPSEQFPCK

Especificaciones del producto

• Nombre del producto: DropSeq Fluidic
• Número de pieza: ODROPSEQFPCK
• Versión: 20 de octubre

Información del producto

El protocolo DropSeq Fluidic tiene como objetivo explicar cómo replicar la parte fluídica del protocolo DropSeq de Macosco utilizando controladores de presión Fluigent en lugar de bombas de jeringa.tagUna de las ventajas de los controladores de presión es su rápida respuesta, lo que permite la generación rápida de gotas. El control de presión permite producir gotas del tamaño adecuado en menos de dos segundos. Además, los sensores de flujo permiten un control directo del flujo, imitando el funcionamiento de una bomba de jeringa.

Materiales y métodos:
Para implementar este protocolo, necesitarás los siguientes materiales:

• Paquete DropSeq
• Producto externo (opcional)
• Varios componentes como se enumeran en la descripción del contenido

Instrucciones de uso del producto

Preparación del dispositivo para un nuevo experimento:

1. Compruebe los dispositivos PDMS antes de usarlos.
2. Despegue una pequeña área de la película que cubre los generadores.
3. Agregue una gota de dSURFan o surfactante alternativo en la salida y espere.
4. Conecte el tubo al dispositivo microfluídico.
5. Aplique una pequeña presión utilizando Flow-EZ.
6. Espere hasta que salga líquido por las entradas/salidas y ajuste la presión nuevamente a 0 mbar.
7. Ponga en marcha los agitadores vórtex y aplique presión a los depósitos hasta que salga líquido.
8. Conecte todos los tubos según el esquema.

Lanzamiento de un experimento:
Tras la conexión correcta, inicie una ejecución de DropSeq aplicando presión a diferentes depósitos mediante el software AiO. Las gotas deberían formarse en unos segundos.

Control de caudal:
Con una unidad de flujo, use el Flow-EZ como bomba de jeringa. El software AiO permite comandos de caudal, ajustando la presión según corresponda. Guarde la configuración de presión una vez establecida.

OBJETIVO DEL PROTOCOLO

• Este protocolo tiene como objetivo explicar cómo reproducir la parte fluídica del protocolo Macosco DropSeq utilizando controladores de presión Fluigent en lugar de bombas de jeringa.
• El avance principaltagUna de las ventajas de los controladores de presión es su rapidez de respuesta. Mediante el control de presión, se pueden generar gotas del tamaño adecuado en menos de dos segundos. Con sensores de flujo, también es posible usar el control de flujo directo para usar el controlador de presión de la misma manera que se usaría una bomba de jeringa.

MATERIALES Y MÉTODOS

Para realizar este protocolo se necesita el siguiente material:

Descripción del contenido de referencia del producto
Paquete DropSeq	ODROPSEQFPCK	3 *FlowEZ 2 barras
		1 * enlace
		1 *Tapa 15 ml
		2 *Cápsula 2ml
		2 *Unidad de caudal M
		1 *Unidad de flujo L
		Chip PDMS DropSeq que contiene 23 diseños
		Kit de suministro Flow EZ
		2*Kit de bajo caudal
		Kit de alto caudal
		Kit de conexión y tubos DropSeq
Producto opcional	IMCA001	Microscopio digital de alta velocidad
	DR-RE-SU-12	12 ml dSURF
	FLPG+	Fuente de presión
Producto externo	Cuentas con código de barras	Perlas con código de barras: Chemgenes CSO-2011*
	Mezclador de vórtice	Mezclador Vortex: Sigma, Fisher Scientific…

El primer paso es recrear la siguiente configuración.

PROTOCOLO

Preparando el dispositivo para un nuevo experimento
Al iniciar un nuevo experimento, se recomienda vaciar completamente el aire del chip y del tubo. Para ello, siga estos pasos:

1. Antes de utilizar los dispositivos PDMS, revise cuidadosamente los generadores. Si tiene alguna duda o pregunta, no dude en contactarnos.
2. No retire completamente la película al principio. Corte una pequeña área para cada generador antes de usarla. (Todos nuestros chips PDMS están recubiertos con una película de sellado, una película de sellado porosa e hidrofóbica con adhesivo de grado médico para placas de cultivo de tejidos).
3. Añada una gota de dSURF (o aceite fluorado con otro surfactante si no utiliza dSURF) a la salida antes de comenzar el experimento y espere unos minutos. Aumente gradualmente los caudales de las fases de aceite fluorado y acuosa. Evite pasar de 0 a ~14 mL/h (o caudales máximos) directamente.
4. Conecte el tubo dSURF (o aceite fluorado con otro surfactante si no utiliza el dSURF) al puerto de entrada derecho del dispositivo microfluídico.
5. Aplique una pequeña presión utilizando el Flow-EZ (unos 200 mbar deberían ser suficientes)
6. Espere hasta que vea que sale algo de aceite por las entradas y salidas abiertas del chip y luego ajuste la presión nuevamente a 0 mbar.
7. Ponga en marcha los agitadores vórtex y aplique una pequeña presión a los otros dos depósitos hasta que vea una pequeña gota de líquido saliendo del extremo del tubo.
8. Detenga todas las presiones y conecte todos los tubos de acuerdo con el esquema.

Lanzamiento de un experimento
Una vez conectado el dispositivo correctamente, iniciar una ejecución de DropSeq es muy rápido. Simplemente aplique las siguientes presiones a los diferentes reservorios con el software AiO. Las gotas deberían aparecer en menos de unos segundos.

• P (Aceite) = 1300 mbar
• P (Células) = 540 mbar
• P (Cuentas) = 580 mbar
  Estas presiones deberían generar gotas de aproximadamente 90-130 µm, lo que conduce a tasas de encapsulación de 1 a 3 ).
  Consejo:
  Con el software AiO, las configuraciones de presión se pueden guardar fácilmente. Esto permite ajustar todas las presiones a un punto determinado al mismo tiempo.

Control de caudal

• Combinado con una unidad de flujo, el Flow-EZ puede utilizarse como una bomba de jeringa. El software AiO permite controlar el caudal. Un circuito de retroalimentación del caudal ajusta las presiones al valor correcto. Esta técnica puede ser útil para evaluar las presiones necesarias para el experimento.
• Una vez en el estado correcto, se puede guardar la configuración de presión.

  

Para obtener información adicional, contáctenos por correo electrónico: contact@fluigent.com o consulte nuestro websitio: www.fluigent.com.

Preguntas frecuentes

¿Qué tan rápido se pueden generar gotas usando controladores de presión?

Se pueden generar gotas del tamaño adecuado en menos de dos segundos utilizando controladores de presión.

¿Puedo utilizar el control de flujo directo con este protocolo?

Sí, los sensores de flujo permiten un control directo del flujo similar al uso de una bomba de jeringa.

Documentos / Recursos

Sensor de flujo microfluídico bidireccional FLUIGENT ODROPSEQFPCK [pdf] Manual de instrucciones ODROPSEQFPCK, IMCA001, DR-RE-SU-12, Sensor de flujo microfluídico bidireccional ODROPSEQFPCK, ODROPSEQFPCK, Sensor de flujo microfluídico bidireccional, Sensor de flujo microfluídico, Sensor de flujo

Referencias

• Manual de usuario